大豆生物钟基因GmLNK1/2、GmRVE4/8和GmTOC1 CRISPR/Cas9组织表达分析及敲除靶点的鉴定 作物学报    2020, 46 (8): 1291-1300.   DOI: 10.3724/SP.J.1006.2020.94169

表3 靶点检测引物

正文中引用本图/表的段落

大豆生物钟基因靶点编辑有效性检测步骤如下: (1)用1.6中收集的大豆根毛提取DNA。(2)利用CRISPR/Cas9载体通用引物SP1和SP3 (表3)检测大豆根毛是否为转基因根毛(目的片段的长度约为2000 bp左右), 检测每个载体20个转基因事件以检测靶点编辑效率。(3)根据每个基因的DNA序列, 分别设计扩增目的基因的靶点检测特异引物。利用每个基因的靶点特异引物(表3)进行PCR扩增目的片段, 将PCR产物送广州天一辉远测序服务公司测序。(4)分析测序结果的峰图, 如果在靶点附近发生套峰, 证明目的基因的靶点是有效的。

本文的其它图/表

• 表1 基因靶点引物列表
  
• 表2 萌发培养基与根诱导培养基
  
• 图1 同源性比对
  A: AtLNK1与GmLNK1a、GmLNK1b、GmLNK1c、GmLNK1d氨基酸序列对比; B: AtLNK2与GmLNK2a、GmLNK2b、GmLNK2c、GmLNK2d氨基酸序列对比; C: AtTOC1与GmTOC1a、GmTOC1b、GmTOC1c、GmTOC1d氨基酸序列对比; D: AtRVE4、AtRVE8与GmRVE4/8a、GmRVE4/8b、GmRVE4/8c、GmRVE4/8d氨基酸序列对比。
  
• 图2 4个生物钟基因组织特异表达
  A: GmLNK1a/b/c/d在W82中的组织特异表达; B: GmLNK2a/b/c/d在W82中的组织特异表达; C: GmTOC1a/b/c/d在W82中的组织特异表达; D: GmRVE4/8a/b/c/d在W82中的组织特异表达。
  
• 图3 Cas9载体结构图
  a: 靶点LNK1T1、LNK2T1、TOC1T1和RVE4/8T1; b: 靶点LNK1T2、LNK2T2、TOC1T2和RVE4/8T2; c: 靶点LNK1T3、LNK2T3、TOC1T3和RVE4/8T3; d: 靶点LNK1T4、LNK2T4、TOC1T4和RVE4/8T4。
  
• 图4 发生编辑靶点的测序峰图
  A: GmLNK1a的靶点LNK1T1、GmLNK1b的靶点LNK1T2、GmLNK1c的靶点LNK1T4和GmLNK1d的靶点LNK1T4突变情况; B: GmLNK2a的靶点LNK2T1、GmLNK2b的靶点LNK2T1、GmLNK2c的靶点LNK2T4和GmLNK2d的靶点LNK2T4突变情况; C: GmTOC1b的靶点TOC1T2、GmTOC1c的靶点TOC1T4和GmTOC1d的靶点TOC1T4突变情况; D: GmRVE4/8b的靶点RVE4/8T1和GmRVE4/8d的靶点RVE4/8T4突变情况。