%A 罗兵, 薛丽琰, 朱利泉, 张贺翠, 彭一波, 陈松, 杨红, 杨昆, 李成琼, 王小佳 %T 利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用 %0 Journal Article %D 2011 %J 作物学报 %R 10.3724/SP.J.1006.2011.00579 %P 579-586 %V 37 %N 04 %U {https://zwxb.chinacrops.org/CN/abstract/article_4785.shtml} %8 2011-04-12 %X 为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用。并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK× pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明, eSRK与SCR蛋白能够相互结合, 为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。