%A 宋明,许俊强,孙梓健,汤青林,王志敏,王小佳 %T 结球甘蓝花粉类钙调素蛋白基因BoCML49的克隆及表达分析 %0 Journal Article %D 2012 %J 作物学报 %R 10.3724/SP.J.1006.2012.02162 %P 2162-2169 %V 38 %N 12 %U {https://zwxb.chinacrops.org/CN/abstract/article_5258.shtml} %8 2012-12-12 %X
以结球甘蓝E1为材料,提取花粉萌发前和萌发后的混合花粉总蛋白,总蛋白双向电泳后通过MALDI-TOF-MS鉴定分析差异点,根据差异点分析结果,利用同源克隆得到甘蓝BoCML49基因707 bpcDNA片段。通过对BoCML49基因的qPCR分析表明其表达量在花粉萌发前约为萌发后的2.73倍,表明BoCML49基因在花粉萌发后表达下调。通过5¢-Race3¢-Race分别得到550 bp721 bp大小cDNA片段,最终得到结球甘蓝BoCML49全长cDNA序列,开放阅读框位于125~
1 078 bp处,加尾信号(AATAAA)位于第1 222 bp处。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoCML49编码317个氨基酸残基,预测分子量为33.51 kDpI6.93,经Smart-embl预测其含2个重要的EF-hand结构,分别位于序列第150~178和第216~244位氨基酸残基处,预测结果显示其含有7α-螺旋和10β-折叠结构。系统发育树表明结球甘蓝BoCML49与拟南芥AtCML49AtCML50的亲缘关系较近BoCML49基因的原核表达得到37.55 kD的融合蛋白。