%A 朱娉慧**,陈冉冉**,于洋,宋雪薇,李慧卿,杜建英,李强,丁晓东,朱延明* %T 碱胁迫相关基因GsWRKY15的克隆及其转基因苜蓿的耐碱性分析 %0 Journal Article %D 2017 %J 作物学报 %R 10.3724/SP.J.1006.2017.01319 %P 1319-1327 %V 43 %N 09 %U {https://zwxb.chinacrops.org/CN/abstract/article_6351.shtml} %8 2017-09-12 %X

WRKY蛋白属于锌指型转录调控因子, 能够参与植物多种逆境响应。本研究利用前期野生大豆盐碱胁迫RNA-seq测序数据, 从构建的碱胁迫基因调控网络中筛选并克隆到GsWRKY15基因。分析GsWRKY15在碱胁迫下野生大豆根中的表达模式, 发现该基因受碱胁迫诱导显著上调表达, 且在胁迫后1 h表达量最高。分析GsWRKY15基因在野生大豆各组织中的表达特异性, 发现该基因在各组织中均有表达, 花中表达量最高。采用根癌农杆菌侵染苜蓿子叶节方法, 将GsWRKY15转化肇东苜蓿, 获得39株抗性植株。通过PCR、Southern blot和RT-PCR方法分析抗性植株, 获得了超量表达GsWRKY15基因的转基因株系并对其进行了耐碱性分析。在150 mmol L–1 NaHCO3处理2周后转基因苜蓿生长状态良好, 而非转基因苜蓿出现萎蔫、变黄、甚至死亡; 非转基因苜蓿的相对质膜透性和丙二醛含量显著高于转基因苜蓿, 而叶绿素含量显著低于转基因苜蓿; 同时分析碱胁迫下转基因植株中胁迫相关基因的表达模式, 发现H+-Ppase、NADP-ME、KIN1、RD29A基因的表达量高于非转基因苜蓿。结果表明GsWRKY15基因的超量表达能够显著增强苜蓿的耐碱能力。