%A 张小芳,董秋平,乔潇,乔亚科,王冰冰,张锴,李桂兰 %T 基于Cre/loxP系统的无筛选标记转耐低磷转录因子GmPTF1大豆种质创制与分析 %0 Journal Article %D 2019 %J 作物学报 %R 10.3724/SP.J.1006.2019.84118 %P 683-692 %V 45 %N 5 %U {https://zwxb.chinacrops.org/CN/abstract/article_6661.shtml} %8 2019-05-12 %X

筛选标记基因在转基因植物应用中存在一定潜在安全风险, 在转基因植物改良中如何合理消除该基因非常必要。转录因子PTF1具有改善植物在低磷胁迫下吸收磷效率的作用。本研究用根癌农杆菌介导法将Cre/loxP- GmPTF1导入大豆品种豫豆22, 利用β-雌二醇诱导Cre/loxP系统删除筛选标记基因, 获得了无筛选标记的转GmPTF1基因大豆。用PCR法扩增删除标记基因后的重组序列并测序显示, 筛选标记基因在大豆基因组中已经被完全删除, 重组序列中目的基因序列正确并保持了正确开放读码框; loxP位点重组出现一种新的拼接类型, 重组后2个loxP序列全部缺失, 新重组拼接位点长38 bp, 与NCBI数据库的其他序列均无同源性, 并且重组涉及2个loxP位点的外侧翼序列, 造成Cre/loxP 盒上游loxP和下游loxP外侧翼序列部分缺失。经过RT-PCR和Western杂交验证显示无筛选标记转基因大豆植株中GmPTF1能够正常转录和翻译, 在根系、叶片及茎中的GmPTF1蛋白表达量均高于野生型对照, 而在种子中与对照无显著差异。沙培试验表明, 在低磷条件下无筛选标记转基因大豆苗期根系指标、生物干重、叶绿素含量和磷含量均显著高于野生型对照, 而丙二醛含量低于对照。利用Cre/loxP重组系统可以有效删除转基因大豆中的筛选标记基因。