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为了解近年北方冬麦区育成优质小麦品种的品质状况, 2013—2014和2014—2015年度在山东济宁和河北高邑统一种植52份优质品种(系)及6份国外代表性品种, 测定其磨粉品质、和面仪和混合实验仪特性、淀粉糊化特性及面条品质, 并利用5个基因特异性标记分析基因型分布及其对品质性状的影响。结果表明, 大部分品种为硬质、中强筋类型, 品种间出粉率、面粉a*值、b*值、黄色素含量、PPO活性、和面仪参数、混合实验仪形成时间和稳定时间差异较大。和面仪8 min带宽和混合实验仪稳定时间可作为预测面条品质的重要指标, 可分别解释面条总分变异33.3%和34.4%。 Ppo-A1a和 Ppo-A1b频率为41.4%和58.6%, 两种基因型间PPO活性差异显著( P< 0.05); Ppo-D1a和 Ppo-D1b频率为51.7%和48.3%, 但PPO活性差异不显著; Psy-A1a和 Psy-A1b频率为81.0%和19.0%, 两种基因型间黄色素含量差异显著( P< 0.05); 1BL/1RS易位和非易位品种频率为13.8%和86.2%, 两种基因型间面粉L*值、黄色素含量、和面仪衰落势与8 min带宽、混合实验仪稳定时间等差异显著( P< 0.05)。面条品质较好的品种包括Sunzell、石优17、郑麦366、中麦895、周麦26、CA1004和石4185。本研究明确了58份小麦品种(系)的品质特征和基因型分布, 为优质小麦新品种选育和推广提供了重要信息。
Fifty-two cultivars and lines from Northern China Winter Wheat Regions, and six cultivars from Australia and America were planted in two locations in two years to evaluate their milling quality, Mixograph and Mixolab parameters, pasting properties and noodle quality. Five gene-specific markers were used to test their effects on quality traits. The results indicated that most of the tested cultivars were featured with hard grain and strong gluten. Large variations of flour yield, flour a* value, b* value, yellow pigment content, PPO activity, Mixograph parameters, Mixolab parameters such as development time and stability were observed. The Mixograph parameter width at 8 min and Mixolab parameter stability were important for predicting noodle quality, accounting for 36.9% and 28.0% of the variation for noodle total score, respectively. Ppo-A1aand Ppo-A1bgenotypes had the frequency of 41.4% and 58.6%, respectively, with significant difference in ( P< 0.05) PPO activity. The frequency of Ppo-D1a and Ppo-D1bwas 51.7% and 48.3%, respectively, and there was no significant difference in PPO activity between two genotypes. The frequency of Psy-A1a and Psy-A1b was 81.0% and 19.0%, respectively, and the yellow pigment contents of two genotypes were significantly different ( P < 0.05). The 1BL/1RS and non-1BL/1RS cultivars had the frequency of 13.8% and 86.2%, respectively, with significant difference ( P < 0.05) in flour L* value, yellow pigment content, Mixgraph parameters such as right of peak slope and width at 8 min, and Mixolab parameter stability. Four cultivars including Zhoumai 26, Zhongmai 895, Sunzell, and CA1004 showed excellent noodle quality. This study provides important informations for wheat breeding and cultivar extension.
小麦是我国第三大粮食作物, 了解最新育成品种的品质状况对小麦育种和生产都具有重要指导意义[1]。磨粉品质是小麦加工品质的重要内容, 主要包括籽粒硬度、出粉率、面粉颜色等指标, 其中面粉及其制品颜色受黄色素和多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)等影响较大[2]。面团流变学特性是面团耐揉性和黏弹性的综合表现[3], 和面仪(Mixograph)和混合实验仪(Mixolab)是评价面团流变学特性的常用仪器, 能在一定程度上反映品种品质优劣。Mixolab近年开始在国内外广泛应用, 能有效反映面粉加水后恒温揉混、面团升温后蛋白质弱化及淀粉糊化特性, 对面包、饼干、糕点和面条的品质特性具有很好预测作用[4, 5, 6, 7, 8]。面条是我国传统主食之一, 其品质主要受籽粒硬度、蛋白质含量、面粉色泽相关性状、面筋质量及淀粉糊化参数影响, 面条品质遗传改良已成为我国育种的主要目标[9, 10, 11, 12, 13, 14]。因此, 明确最新育成品种品质特征及混合实验仪参数等对面条品质的影响, 可为小麦品质改良提供理论依据。
分子标记技术的发展为准确快速鉴定品质性状相关基因提供了可能。用PPO活性的基因特异性标记PPO18能检测等位基因PPO-A1a和PPO-A1b[15], 互补显性标记PPO16和PPO29能检测等位基因PPO-D1a和PPO-D1b[16]; 黄色素含量的基因特异性标记YP7A能检测等位基因Psy-A1a和Psy-A1b[17]。上述基因特异性标记可作为面粉色泽改良的分子育种辅助工具[18, 19]。H20能特异性检测1BL/1RS易位系[20], 1BL/1RS易位对面条品质有显著负向影响, 能显著提高黄色素含量, 但对淀粉特性影响不显著[17, 21, 22, 23]。利用基因特异性标记能快速明确品质性状的基因型, 有助于了解品种品质状况, 为品质改良提供基因型基础。
改良小麦品质是我国育种和生产的重要目标, 因此定期全面系统分析新育成品种品质特性具有重要意义。He等[24]对2000年前后国内育成的优质品种进行了面团流变学特性分析及面包、面条品质评价, Zhang等[25]对2003年前后我国北方冬麦区大面积推广的19份优质品种品质特性进行系统分析, 唐建卫等[7]对2005年前后42份北方冬麦区育成的优质强筋品种及山东省主栽品种品质性状进行研究。2011年至今, 北方冬麦区又相继育成了一批优质品种(系), 但其品质资料来自不同地点样品在不同实验室的测定结果, 可比性差, 难以为育种单位、生产和面粉加工企业提供准确详细的品种信息。因此, 我们以两年两点试验全面系统分析供试品种的磨粉品质、和面仪与混合实验仪特性、淀粉糊化特性及面条品质, 为优质小麦新品种选育和生产提供理论依据。
供试材料包括我国1990— 2010年育成的优质品种17份和2011年及以后育成的优质品种(系) 32份, 以及高产对照品种3份、美国和澳大利亚代表性优质品种6份(表1), 其中1990— 2010年育成品种济麦20、豫麦34、郑麦366具有较好的面包、面条品质, 中优206、师栾02-1、藁城8901、济南17、新麦26为优质强筋麦。
2013— 2014和2014— 2015年度, 将所有品种种植于山东济宁和河北高邑, 随机区组设计, 2次重复, 小区面积6.0 m2, 行长4.0 m, 行距0.2 m, 6行区, 按当地常规管理。所有样品无穗发芽, 收获后统一磨粉。
用单籽粒谷物特性测试仪(SKCS 4100 Perten Instruments AB, Sweden)测定籽粒硬度。用近红外(NIR)分析仪(Foss 1241, Sweden)测定籽粒蛋白质含量(14%湿基)和水分。根据硬度值确定润麦目标水分, 硬质麦水分为16.5%, 混合麦为15.5%, 润麦16~ 18 h, 用Senior实验磨(Brabender, Germany)制粉, 出粉率为65%左右。
用Minolta CR-310色度仪(Minolta Camera Co., Ltd., Japan)测定面粉L* 值、a* 值和b* 值。参照AACC 14-50 (AACC 2000)方法, 稍作修改, 测定黄色素含量, 即用水饱和正丁醇溶液提取后比色测定, 称样量为1 g, 提取液为5 mL, 振荡时间为1 h, 测吸光度乘以常数30.1即为结果。参照Anderson等[26]的方法, 稍作修改, 测定PPO活性, 即称样量1 g, 提取液7.5 mL, 振荡时间0.5 h。
用和面仪Mixograph (National, America), 按AACC 54-40A方法测定和面仪参数。用混合实验仪Mixolab (Chopi Technologies, France)按操作手册测定主要参数, 包括吸水率(面粉形成面团所需的适宜加水量)、形成时间(面粉从加水至曲线峰高所需时间)、稳定时间(面粉从加水至曲线第一次离开1.05 Nm标线所需时间)、C2值(面团加热后的蛋白质弱化值)、C3值(面团加热过程中的淀粉糊化峰值)、C4值(淀粉糊化低谷值)、C5值(面团冷却过程中的淀粉糊化最终值)。参照阎俊等[27]描述的方法, 用快速黏度分析仪(Super 3, Newport, Australia)测定淀粉糊化特性, 反应液参数修改为170 mg L-1 AgNO3溶液25 mL。
面条制作与品质评价, 参照张艳等[28]方法, 评分系统为色泽15分、表观状况10分、软硬度20分、黏弹性30分、光滑性15分、食味10分, 即总分为100分。以面条品质较好的商业面粉雪花粉(70分)为对照样品, 将面条品质分为较好(≥ 70分)、一般(60.0~69.9分)和较差(< 60分)三类。
从每个品种选3粒大小均匀的种子, 粉碎后放入1.5 mL离心管, 按Lagudah等[29]描述的方法提取籽粒基因组DNA。利用特异性分子标记(表2)检测Ppo-A1、Ppo-D1、Psy-A1的等位变异及1BL/1RS易位系。PCR体系20 μ L, 含20 mmol L-1 Tris-HCl (pH 8.4)、20 mmol L-1 KCl、150 μ mol L-1 dNTPs、1.5 mmol L-1 MgCl2、每条引物8 pmol、TaqDNA聚合酶1 U、模板DNA 50 ng。PCR程序见附表1。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离检测, 缓冲液体系为1× TAE, 电压180 V, 电泳30 min。用溴化乙锭(EB)染色, GelDoc XR System (Bio-Rad, America)扫描成像存入计算机。根据DNA检测结果判断品种基因型。
用Microsoft Excel 2010整理数据和作图, 用SAS (Statistical Analysis System) V9.2软件进行方差分析、基本统计量计算及品质性状间相关分析, 并对不同基因型品质性状进行多重比较(Duncan’ s)。
方差分析表明, 所有品质性状基因型和环境间均差异显著(P< 0.01); 除出粉率、面粉L* 值、混合实验仪C3值外, 其他性状基因型× 环境互作间均差异显著(P< 0.01), 但磨粉品质、面粉颜色相关性状、和面仪与混合实验仪参数、淀粉特性参数、面条品质性状(除面条表观状况和食味)基因型与基因型× 环境互作均方的比值(> 1.5)较高, 说明品质性状受基因型、环境及基因型× 环境互作的共同影响, 但基因型效应远大于基因型× 环境互作。
由表3和附表3可知, 供试材料的籽粒硬度均值为67.7, 其中54份为硬质麦(硬度值≥ 60), 中麦629、中麦895、周麦26和周麦24为混合麦(40≤ 硬度值< 60)。出粉率变幅为57.8%~68.1%, 其中13CA66、农大3753、中优206和中麦1062出粉率较高, 达到67%以上。品种间面粉a* 值、b* 值、黄色素含量和PPO活性差异较大, 变异系数为14.3%~ 27.8%。黄色素含量较低的品种包括西农979、武农986、Livingston, 黄色素含量较高的品种包括西农509、中麦895; PPO活性较低的品种包括藁城8901、师栾02-1, PPO活性较高的品种包括周麦26、中麦895。
品种间和面仪参数差异均较大, 变异系数为26.4%~73.0%。按照和面仪峰值面积划分, 34份为强筋类型(峰值面积≥ 135 %tq× min), 17份为中筋类型(100 %tq× min≤ 峰值面积< 135 %tq× min), 7份为弱筋类型(峰值面积< 100 %tq× min)。品种间混合实验仪形成时间和稳定时间差异较大, 变异系数分别为 26.2%和22.9%。RVA参数仅稀澥值在品种间差异较大, 变异系数为15.4%。根据和面仪峰值面积, 面筋强度较好(峰值面积≥ 180 %tq× min)的品种包括济麦0860229、师栾02-1、新麦26、13CA66、Karl、西农509、GY12014、周麦24、中优206、12品404, 面筋强度较弱(峰值面积< 70 %tq× min)的品种包括中麦895、周麦26、石4185。RVA峰值黏度较高(峰值黏度> 3300 cP)的品种包括郑麦366、周麦24、Sunzell、新麦26、周麦32、12品404、郑5373、山农11-28、新麦28。其中济麦0860229、13CA66、西农509、GY12014、12品404的峰值面积接近或好于1990— 2010年育成的品种师栾02-1、新麦26、周麦24、中优206 及国外品种Karl; 周麦32、12品404、郑5373、山农11-28、新麦28的峰值黏度接近郑麦366、周麦24、新麦26及Sunzell。
品种间面条品质性状差异均较小, 总分变幅为60.9~71.4, 其中面条品质较好的品种(总分≥ 70)包括Sunzell (71.4分)、石优17 (71.0分)、郑麦366 (70.9分)、中麦895 (70.9分)、周麦26 (70.9分)、CA1004 (70.7分)和石4185 (70.3分), 其余品种面条品质总分为60.0~69.9。根据面条总分, 中麦895、周麦26、CA1004接近1990— 2010年育成品种郑麦366、石优17及国外品种Sunzell。
综上所述, 供试品种大部分属于硬质、中强筋类型, 品种间籽粒硬度、蛋白质含量、淀粉糊化参数(除稀澥值外)和面条品质差异较小, 出粉率、面粉a* 值、b* 值、黄色素含量、PPO活性、和面仪参数、混合实验仪形成时间和稳定时间差异较大。
2.2.1 面粉颜色性状间相关分析 相关分析表明, 面粉b* 值与黄色素含量呈极显著正相关, r值为0.94, 可解释黄色素含量变异88.4% (图1)。面粉L* 值与PPO活性呈极显著正相关, r值为0.50, 可解释PPO活性变异24.9%。说明面粉颜色受黄色素含量和PPO活性影响较大。由于面粉b* 值测定简单易行, 稳定性好, 因此其可作为预测黄色素含量的有效指标。
2.2.2 影响面条品质的因素分析 由表4可知, 面条食味与面粉a* 值、b* 值和黄色素含量极显著相关, r值分别为-0.71、0.61和0.66; 面条软硬度与峰值时间、峰值面积、衰落势、8 min带宽、形成时间
和稳定时间呈极显著负相关, r值为-0.73 ~ -0.56, 其中衰落势、8 min带宽和稳定时间分别解释面条软硬度变异的45.7%、53.7%和47.5% (图2-A, C, E); 面条光滑性与籽粒硬度、峰值面积、衰落势、8 min带宽、稳定时间和C2值呈极显著负相关, r值为-0.63 ~ -0.51; 面条总分与衰落势、8 min带宽、形成时间和稳定时间呈极显著负相关, r值为-0.59~-0.53, 其中8 min带宽和稳定时间分别解释面条总分变异的33.3%和34.4% (图2-D, F); 面条黏弹性与峰值黏度和低谷黏度呈极显著正相关, r值分别为0.59和0.53, 峰值黏度可解释面条黏弹性变异的34.9% (图2-B)。说明面筋强度对面条软硬度、光滑性和总分有显著负向影响, 淀粉特性对面条黏弹性有显著正向影响。
在58份材料中, Ppo-A1a和Ppo-A1b基因型分别为24份和34份, 频率分别为41.4%和58.6%, 基因型间PPO活性差异显著; Ppo-D1a和Ppo-D1b基因型分别为30份(51.7%)和28份(48.3%), 基因型间PPO活性差异不显著, 说明供试品种PPO活性受Ppo-D1影响较小。Psy-A1a和Psy-A1b基因型分别为47份和11份, 频率分别为81.0%和19.0%, 基因型间黄色素含量、面粉b* 值差异显著(表5)。
58份供试品种中50份为非1BL/1RS易位系, 占86.2%; 8份为1BL/1RS易位系, 主要分布在黄淮南片, 多为周麦号品种或其后代。1BL/1RS易位系的籽粒硬度、出粉率、衰落势、8 min带宽和稳定时间显著低于非1BL/1RS易位系, 而面粉L* 值、黄色素含量、PPO活性和淀粉糊化参数(除稀澥值外)显著高于非1BL/1RS易位系(表6)。这说明1BL/1RS易位对籽粒硬度、出粉率和面筋强度有显著负向影响, 对面粉L* 值、黄色素含量、PPO活性和淀粉特性有显著正向影响。
总体来看, 1BL/1RS易位系和非1BL/1RS易位系的面条品质差异显著。这种差异主要体现在1BL/1RS易位系品种的面条表观状况显著低于非1BL/1RS易位系品种, 软硬度、黏弹性、光滑性和总分显著高于非1BL/1RS易位系品种, 而面条颜色和食味差异不显著(表7)。说明供试品种中, 1BL/1RS易位对面条表观有显著负向影响, 对面条口感质地及总分有显著正向影响。
58份供试品种间籽粒硬度、蛋白质含量、淀粉糊化参数和面条品质差异较小, 出粉率、面粉a* 值、b* 值、黄色素含量、PPO活性、和面仪参数、混合实验仪形成时间和稳定时间差异较大。品种间差异
主要表现在面筋强度和面粉颜色, 且品种淀粉糊化特性普遍偏差, 主要原因是我国育种家选择优质品种时以面筋强度为主要依据, 对淀粉特性考虑较少。因此, 今后在注重面筋质量(尤其是延展性)改良同时, 应加强色泽和淀粉特性选择。在供试材料中, 藁优2018与济麦20的品质特征参数基本一致, 且所携带基因型(Ppo-A1b、Ppo-D1a、Psy-A1a、非1BL/1RS)完全一致, 推测藁优2018为济麦20选系, 育种单位所提供的信息有误, 这与田间观察结果一致。品种间面条品质差异较小, 2010年以后育成品种中麦895、周麦26、CA1004制作的面条软硬度、黏弹性和光滑性较好, 因而面条品质评分较高, 但总分略低于1990— 2010年育成的石优17、郑麦366及国外优质品种Sunzell。唐建卫等[7]研究表明, 济麦20面包、面条和馒头品质均较好, 郑麦366面包、面条品质较好; Zhang等[25]报道, 济麦20面条品质较好, 豫麦34面条、馒头品质较好; 杨金等[30]则提出豫麦34为面包面条兼用品种。在本研究中, 郑麦366也表现面条品质较好, 但济麦20和豫麦34则面条品质一般, 主要原因是黏弹性较差。
面粉及面制品颜色的形成受色素类物质、氧化还原酶类、磨粉品质等因素影响。本文的面粉b* 值与黄色素含量呈极显著相关, r值为0.94, 与Zhang等[31]、Roncallo等[32]、Zhai等[33]的研究结果基本一致。说明黄色素含量对面粉颜色有显著负向影响, 因此以面条和馒头为主要产品时, 应降低黄色素含量。PPO活性随出粉率、麸星含量的提高而提高[34, 35, 36], 葛秀秀等[37]认为面粉L* 值与PPO活性呈极显著负相关, 但本研究面粉L* 值与PPO活性呈极显著正相关(r = 0.50), 可能是所用实验磨不同致使出粉率和麸星含量不同造成的。用基因特异性标记能快速鉴定品质性状基因型, 为育种提供了简单易行的鉴定方法。本研究PPO18、YP7A标记分别能有效反映品种PPO活性、黄色素含量与面粉b* 值, 因此根据其基因型选配亲本, 并利用标记在育种早代选择, 可加速面制品颜色的改良。至于面粉黄色素含量、a* 值、b* 值与面条食味的关系还有待进一步研究。
面条品质改良已成为我国育种的主要目标[14]。本文的面粉a* 值、衰落势、8 min带宽、稳定时间、C2值、峰值黏度对面条品质均有显著影响, 与前人研究结果基本一致, 即面粉色泽、面筋强度和淀粉特性对面条品质有显著影响[6, 9, 10, 11, 12, 13, 14]。Liu等[13]和He等[14]认为面筋强度过强对面条品质有负向影响, 本研究和面仪参数、混合实验仪参数与面条软硬度、总分呈负相关, 主要是因为面筋强度过强使面条硬度较大, 导致适口性较差, 因而软硬度评分和总分较低。Jagger为美国优质面包麦, 过高的面筋强度导致面条软硬度分值较低, 因而面条品质一般偏差。RVA峰值黏度与面条黏弹性呈极显著正相关, 可解释变异34.9%, 我国品种的淀粉峰值黏度急需改进, 可用峰值黏度较高的品种Sunzell和郑麦366等作为杂交亲本。周麦26和中麦895的面筋强度弱, 且为1BL/1RS易位系, 但面条品质优良, 其原因有待进一步研究。
1BL/1RS易位系的利用导致我国小麦品质变劣, 主要表现在面筋质量变差、面团发黏与耐揉性减弱、加工品质变劣、烘焙品质变差[22, 24]。本研究1BL/1RS易位对面筋强度有显著负向影响, 与刘建军等[22]结论一致。因此, 选育中、强筋品种一般不宜采用1BL/1RS易位品种作为杂交亲本, 或至少其中一个亲本为非1BL/1RS易位品种。Zhang等[31]发现一个与1BL/1RS连锁的黄色素含量主效QTL, 可解释31.9%表型变异; Zhai等[33]在1RS上定位到黄色素含量QTL, 可解释32.2%表型变异。本研究的1BL/1RS易位对黄色素含量有显著正向影响, 与He等[17]结论一致, 说明1BL/1RS易位能显著提高黄色素含量。Zhao等[38]表明1BL/1RS易位能显著降低籽粒硬度, 本研究也证明了这一点, 而刘建军等[22]、Amiour等[39]认为1BL/1RS易位对籽粒硬度影响不显著, 有关1BL/1RS易位对籽粒硬度的影响还有待进一步研究。此外, 1BL/1RS易位对面条品质也有一定影响。本研究1BL/1RS易位对面条表观状况有显著负向影响, 对面条软硬度、黏弹性、光滑性和总分有显著正向影响, 且1BL/1RS易位使面筋强度有显著负向影响。说明面筋强度与面条表观状况呈正相关, 与面条软硬度、黏弹性、光滑性和总分呈负相关, 与前文面条品质影响因素分析结果吻合, 但与刘建军等[22]、He等[24]结论不一致, 可能是1BL/ 1RS易位与非易位品种数目差异较大和未知的遗传因素造成的, 有待进一步分析验证。有关粉质仪和拉伸仪参数、蛋白组分含量及面包、馒头方面的研究将在另文中报道。
明确了北方冬麦区新育成品种(系)的品质特征及其携带的部分品质基因, 和面仪8 min带宽和混合实验仪稳定时间可作为预测面条品质的重要指标, 明确了58份材料黄色素含量、PPO活性基因型和1BL/1RS易位分布及其对品质性状的影响。
The authors have declared that no competing interests exist.
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