Please wait a minute...
欢迎访问作物学报,今天是
图/表 详细信息
水稻OsCNGC10基因抗倒伏性以及抗旱性功能研究
朱忠林, 文月, 周棋, 巫燕飞, 杜雪竹, 盛锋
作物学报    2024, 50 (5): 1351-1360.   DOI: 10.3724/SP.J.1006.2024.32027
摘要   (112 HTML13 PDF(pc) (9272KB)(130)  

环核苷酸门控离子通道是一种配体门控的阳离子通道, 存在于动物和植物体内, 是真核生物信号级联反应的重要组成部分。本研究利用水稻环核苷酸门控离子通道(cyclic nucleotide-gated channel, OsCNGC10)基因, 构建了超表达载体 pU1301-CNGC10-Flag和双靶点敲除载体pRGEB32-CRISPR/cas9-cngc10, 通过农杆菌介导的遗传转化法获得敲除和过表达材料, 并从T2代中分离到纯合植株oscngc10-2OE-CNGC10-6。转基因植株茎秆特性以及抗倒伏性分析表明, 突变体oscngc10-2茎秆强度和抗倒伏性增强; 茎秆细胞壁组织切片以及组织成分分析则表明突变体oscngc10-2植株抗倒伏性增强是由于茎秆细胞壁茎壁厚度、薄壁组织细胞丰度以及木质素含量增加所致; 过表达OsCNGC10降低了茎秆壁厚、茎秆木质素含量以及茎秆细胞壁细胞丰度, 敲除OsCNGC10增加了茎秆木质素含量且增加了茎秆细胞壁薄壁细胞丰度, 初步证明OsCNGC10与水稻茎秆细胞壁成分合成相关, 负调控水稻抗倒伏性; T2代田间试验结果表明, 与野生型相比, 突变体oscngc10-2植株的株高、有效穗、穗长、穗粒数、结实率、千粒重和单株产量等农艺性状显著提升; 苗期干旱胁迫实验结果表明, 在干旱胁迫下, OsCNGC10基因缺陷型植株体内丙二醛(MDA)含量积累速度加快, 且无法形成足够的游离脯氨酸, 而过表达OsCNGC10植株在遭受干旱胁迫时, 体内游离脯氨酸(Pro)含量大量升高, 且MDA积累速度相对变慢, 初步说明OsCNGC10正向调控水稻苗期抗旱性。本研究结果表明水稻OsCNGC10可能在水稻抗倒伏及抗旱方面有潜在功能, 为培育抗倒伏且高产的水稻新品种提供了理论基础和新的种质资源。



View image in article
图2 OsCNGC10敲除终载体菌落PCR检测
M: Trans 2K; 1~8: 菌落PCR片段。
正文中引用本图/表的段落
本研究所用双靶点敲除载体的构建方式是在华中农业大学谢卡斌教授研究团队开创的tRNA串联法的基础上加以调整[18]。依据OsCNGC10 DNA序列以及基因结构, 设计2个gRNA合成接头引物以及gRNA连入表达载体pRGEB32所需的接头引物(表1); 采用infusion重组的方法将串联好的PCR产物到线性化的pRGEB32载体中。将上述反应产物热激转化大肠杆菌DH5α, 挑单克隆进行阳性检测并测序, 保存阳性菌株和质粒, 并将阳性质粒转化根癌农杆菌EHA105感受态(图2)。
本文的其它图/表