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水稻OsCNGC10基因抗倒伏性以及抗旱性功能研究
朱忠林, 文月, 周棋, 巫燕飞, 杜雪竹, 盛锋
作物学报    2024, 50 (5): 1351-1360.   DOI: 10.3724/SP.J.1006.2024.32027
摘要   (112 HTML13 PDF(pc) (9272KB)(130)  

环核苷酸门控离子通道是一种配体门控的阳离子通道, 存在于动物和植物体内, 是真核生物信号级联反应的重要组成部分。本研究利用水稻环核苷酸门控离子通道(cyclic nucleotide-gated channel, OsCNGC10)基因, 构建了超表达载体 pU1301-CNGC10-Flag和双靶点敲除载体pRGEB32-CRISPR/cas9-cngc10, 通过农杆菌介导的遗传转化法获得敲除和过表达材料, 并从T2代中分离到纯合植株oscngc10-2OE-CNGC10-6。转基因植株茎秆特性以及抗倒伏性分析表明, 突变体oscngc10-2茎秆强度和抗倒伏性增强; 茎秆细胞壁组织切片以及组织成分分析则表明突变体oscngc10-2植株抗倒伏性增强是由于茎秆细胞壁茎壁厚度、薄壁组织细胞丰度以及木质素含量增加所致; 过表达OsCNGC10降低了茎秆壁厚、茎秆木质素含量以及茎秆细胞壁细胞丰度, 敲除OsCNGC10增加了茎秆木质素含量且增加了茎秆细胞壁薄壁细胞丰度, 初步证明OsCNGC10与水稻茎秆细胞壁成分合成相关, 负调控水稻抗倒伏性; T2代田间试验结果表明, 与野生型相比, 突变体oscngc10-2植株的株高、有效穗、穗长、穗粒数、结实率、千粒重和单株产量等农艺性状显著提升; 苗期干旱胁迫实验结果表明, 在干旱胁迫下, OsCNGC10基因缺陷型植株体内丙二醛(MDA)含量积累速度加快, 且无法形成足够的游离脯氨酸, 而过表达OsCNGC10植株在遭受干旱胁迫时, 体内游离脯氨酸(Pro)含量大量升高, 且MDA积累速度相对变慢, 初步说明OsCNGC10正向调控水稻苗期抗旱性。本研究结果表明水稻OsCNGC10可能在水稻抗倒伏及抗旱方面有潜在功能, 为培育抗倒伏且高产的水稻新品种提供了理论基础和新的种质资源。


性状
Characteristics
野生型日本晴
Wild type
突变体
Mutant oscngc10-2
超表达
Overexpression CNCG10-6
生育期Growth period (d) 130 137 121
株高Plant height (cm) 73.23±2.91 90.97±3.22** 63.73±2.83
穗长Panicle length (cm) 15.16±1.43 18.35±2.25* 13.10±1.23
分蘖数Tiller number per plant 32.67±2.52 33.00±2.65 50.00±3.50**
每穗粒数Number of grain per panicle 105.00±4.99 237.00±8.85** 60.00±2.25
一次枝梗数Primary branch number per panicle 8.00±0.41 18.00±0.97* 8.00±0.39
二次枝梗数Secondary branch number per panicle 8.00±0.51 29.00±1.33* 3.00±0.12
千粒重Thousand-seed weight (g) 19.50±0.65 22.50±0.98* 15.10±0.56
理论产量Theoretical yield (t hm-2) 10.80±0.23 12.20±0.35* 6.90±0.11*
结实率Seed fertility (%) 86.50±0.68 93.80±1.90* 80.20±1.30
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表3 转基因植株与野生型(WT)农艺性状分析
正文中引用本图/表的段落
取幼嫩野生型日本晴水稻叶片提取RNA, 利用TaKaRa提供的反转录酶试剂盒, 对抽提后的RNA样品反转录成cDNA。设计RT-qPCR引物, 以Ubiquitin7 (UBQ7, LOC_Os03g13170)作为内参基因, 于CFX Connect Real-Time System (Bio-Rad)进行RT-qPCR分析, 采用2-??CT计算基因的相对表达量, 每个样本设置3次生物学重复。
对转基因材料生育期调查发现, 同时移栽的秧苗, oscngc10-2营养生长期要比OE-CNGC10-6和WT更长, 孕穗期推迟, 全生育期为137 d, 比野生型长7 d (表3)。而过表达材料与野生型相比生育期缩短了9 d。成熟期农艺性状统计分析结果显示, 突变体oscngc10除分蘖数降低以外, 其株高、穗长、每穗粒数、一次枝梗数、二次枝梗数、千粒重和理论产量均显著高于野生型日本晴和过表达材料。
本文的其它图/表