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木薯MYB转录因子基因MeMYB60表达特征分析及其互作蛋白筛选
徐子寅, 于晓玲, 邹良平, 赵平娟, 李文彬, 耿梦婷, 阮孟斌
作物学报    2023, 49 (4): 955-965.   DOI: 10.3724/SP.J.1006.2023.24089
摘要   (530 HTML26 PDF(pc) (5997KB)(703)  

Myeloblastosis (MYB)类转录因子在植物对非生物胁迫的响应过程中起重要调控作用。本研究在分析栽培木薯MYB家族成员表达模式的基础上, 筛选并克隆到了一个R2R3-MYB转录因子基因MeMYB60。基因表达特性分析表明, 该基因在叶片特异表达, 受干旱、低温负调控, 同时对ABA处理也有响应。启动子活性分析发现, MeMYB60可以在保卫细胞表达, 预示着该转录因子基因的表达可能与木薯气孔开闭调节有关。MeMYB60编码蛋白主要定位于细胞核中, 具有转录激活活性, 其转录激活结构域在蛋白C端第194~343氨基酸残基范围内。以MeMYB60蛋白N端第1~194氨基酸残基片段为诱饵, 从干旱胁迫后木薯叶片的cDNA文库中筛选到18种可能与MeMYB60互作的蛋白, 酵母双杂确定了MeCatlase1和MeCatalase2分别与MeMYB60存在互作关系。本研究为深入研究转录因子MeMYB60在木薯响应非生物胁迫过程中的功能并解析其调控网络奠定了基础。



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图5 MeMYB60-eGFP融合蛋白的亚细胞定位
正文中引用本图/表的段落
通过瞬时转化烟草的方法分析MeMYB60蛋白的亚细胞定位。将携带35S:MeMYB60:eGFP: pGAMBIA1300质粒的农杆菌注射烟草叶片下表皮, 3 d后取注射部位周边直径1 cm范围内的叶片, 在激光共聚焦显微镜下观察叶片下表皮细胞中绿色荧光蛋白的定位。以细胞核荧光染料Hoechst33342 (ThermoFisher公司, 目录号: 62249)对表皮细胞的细胞核进行染色。结果如图5所示, 绿色荧光信号与蓝色荧光信号位置重叠, 表明MeMYB60:eGFP融合蛋白主要集中在细胞核中。
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