木薯MYB转录因子基因MeMYB60表达特征分析及其互作蛋白筛选 作物学报    2023, 49 (4): 955-965.   DOI: 10.3724/SP.J.1006.2023.24089

图8 酵母双杂验证MeMYB60与木薯过氧化氢酶的蛋白互作关系

正文中引用本图/表的段落

利用酵母双杂系统, 通过点对点的方式对MeMYB60与过氧化氢酶(MeCAT1和MeCAT2)蛋白之间的互作关系进行验证。由图8可知, 转化MeCAT1 + MeMYB60-194、MeCAT2 + MeMYB60- 194 的酵母可以在QDO/A/X平板上长出蓝色菌斑; 通过交换载体以进一步确认MeMYB60完整蛋白是否可以与MeCAT1和MeCAT2互作, 发现转化MeMYB60-full + MeCAT1、MeMYB60-full + MeCAT2的酵母可以在QDO/A/X平板上长出蓝色菌斑, 而共转化单个基因和空载体的酵母均未能在形成蓝色菌斑。以上结果进一步说明MeCAT1和MeCAT2可能与MeMYB60存在蛋白互作关系。

胁迫相关转录因子常与其互作蛋白协同调控木薯对非生物胁迫的响应。利用病毒介导的基因沉默系统, 研究人员发现木薯MeCIPK23蛋白通过与转录因子互作, 调控脱落酸(ABA)合成并影响木薯的抗旱性[32]。另外, 我们还发现木薯MeGRXC3通过在细胞核中与TGA转录因子互作调控转基因拟南芥对渗透胁迫的耐受性和体内活性氧的累积[33]。此外, 木薯转录因子MeRAV5可与过氧化物酶MePOD和肉桂醇脱氢酶MeCAD15互作, 调控过氧化氢(H₂O₂)和木质素的累积, 从而影响木薯抗旱性[34]。可见, 筛选互作蛋白是研究转录因子功能和分子调控机制的重要前提。本文通过酵母双杂系统, 从木薯cv.60444成熟叶片cDNA文库中筛选到了部分可能与MeMYB60互作的蛋白, 并且初步验证了MeMYB60与过氧化氢酶MeCAT1和MeCAT2之间的互作关系(图8), 为进一步研究MeMYB60的功能奠定了基础。

本文的其它图/表

• 表1 PCR引物名称及序列
  
• 图1 木薯叶片RNA及MeMYB60基因PCR扩增产物电泳图
  
• 图2 MeMYB60 (XP_021622445.1)蛋白与其他植物MYB60蛋白的系统进化树及序列一致性
  
• 图3 木薯MeMYB60与其他植物的同源蛋白氨基酸序列比对
  黑色区块: 氨基酸一致性为100%。
  
• 图4 木薯MeMYB60表达的组织特异性分析(A)及其在叶片中对不同胁迫的响应分析(B)
  内参基因为MeActin1。**表示不同处理样品与对照样品(Control)相比差异极显著(P < 0.01)。误差线为每组处理的标准误差(n = 3)。
  
• 图5 MeMYB60-eGFP融合蛋白的亚细胞定位
  
• 图6 MeMYB60:eGFP融合基因在MeMYB60启动子驱动下的表达分析
  
• 图7 MeMYB60蛋白序列及转录激活结构域分析
  
• 表2 MeMYB60酵母cDNA文库筛选结果